Como escolher a coluna correta?
? ? ? ? ? ? ? ?
Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday
Summary: ① Matriz de empacotamento da coluna cromatográfica A. Matriz de sílica gel: alta pureza, baixo custo, alta resistência, fácil modificação química, mas a faixa de pH é limitada. A maioria dos enchimentos de matriz de sílica é estável entre pH 2......
① Matriz de empacotamento da coluna cromatográfica
A. Matriz de sílica gel: alta pureza, baixo custo, alta resistência, fácil modificação química, mas a faixa de pH é limitada. A maioria dos enchimentos de matriz de sílica é estável entre pH 2-8, mas a fase ligada ao gel de sílica especialmente modificada pode ser estabilizada em pH 1,5-10.
B. Matriz de polímero: ampla faixa de pH de aplicação, temperatura estável (alta temperatura pode chegar acima de 80 graus) e baixa resistência mecânica.
②Forma da partícula
A maioria das cargas modernas de HPLC são partículas esféricas, mas às vezes partículas irregulares. As partículas esféricas proporcionam menor pressão da coluna, maior eficiência e estabilidade da coluna e maior vida útil da coluna. Ao usar uma fase ativa de alta viscosidade; partículas irregulares têm uma área de superfície específica maior e um preço relativamente baixo.
③Tamanho da partícula
Quanto menor o tamanho da partícula, maior a eficiência e maior a resolução, mas ao mesmo tempo levará a uma maior queda de pressão na coluna. Escolha o material de embalagem de 1,5-3μm para resolver algumas amostras complexas, UPLC pode usar embalagem de 1,5μm; outro empacotamento de tamanho de partícula de 10μm ou maior é usado como coluna semipreparativa ou preparativa.
④Teor de carbono
O teor de carbono de uma coluna cromatográfica refere-se à proporção da fase ligada na superfície do gel de sílica, que está relacionada à área superficial específica e à cobertura de ligação. O alto teor de carbono melhora a capacidade, a resolução e o tempo de análise da coluna e é usado para amostras complexas que exigem alta resolução; baixo teor de carbono tem um tempo de análise curto e exibe seletividade diferente, e é usado para análise rápida de amostras simples e fases ativas com alto teor de água. Amostras de condição. Geralmente, o teor de carbono de C18 varia de 7 a 19%.
⑤ Tamanho dos poros e área de superfície específica
O meio de adsorção HPLC é composto por partículas porosas, e a maior parte da superfície de reação está nos poros. Portanto, as moléculas devem entrar nos poros para serem adsorvidas e separadas.
O tamanho dos poros da coluna cromatográfica e a área de superfície específica são dois conceitos complementares. O tamanho dos poros é pequeno e a área de superfície específica é grande e vice-versa. Grande área de superfície específica, aumenta a reação entre a amostra e a fase ligada, aumenta o armazenamento, o carregamento da amostra e a separação de componentes complexos; pequena área de superfície específica, tempo de equilíbrio rápido, adequado para análise de gradiente.
⑥ Volume de poros e resistência mecânica
volume de poros, também conhecido como "volume de poros". Refere-se ao tamanho do volume vazio por partícula. Pode refletir bem a resistência mecânica do enchimento. Preenchimentos com grande volume de poros têm resistência mecânica ligeiramente mais fraca do que aqueles com pequeno volume de poros. Enchimentos com volume de poro de 1,5 mL/g ou menos são usados principalmente para separação por HPLC, enquanto enchimentos com volume de poro maior que 1,5 mL/g são usados para cromatografia de exclusão de tamanho e cromatografia de baixa pressão.
⑦ tampa final
O tamponamento da extremidade da coluna pode reduzir os picos de cauda de compostos básicos polares devido à interação com grupos silanol expostos. A fase ligada não bloqueada terá seletividade diferente em comparação com a fase ligada bloqueada, especialmente para amostras polares.
英语
阿拉伯语
���ļ���