Como limpar e regenerar a coluna após contaminação?
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Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday
Summary: Quando uma coluna cromatográfica está contaminada, seu comportamento cromatográfico será um pouco diferente de uma coluna não contaminada. Colunas contaminadas podem causar problemas de contrapressão. A coluna de fase reversa contaminada deve ser......
Quando uma coluna cromatográfica está contaminada, seu comportamento cromatográfico será um pouco diferente de uma coluna não contaminada. Colunas contaminadas podem causar problemas de contrapressão. A coluna de fase reversa contaminada deve ser limpa e regenerada para restaurar as condições originais de operação. A chave para regenerar uma coluna de HPLC contaminada é conhecer a natureza do contaminante e encontrar um solvente apropriado para removê-lo. Se a contaminação for causada pelo acúmulo de substâncias fortemente retidas durante injeções repetidas, etapas simples para remover esses contaminantes podem muitas vezes restaurar o comportamento cromatográfico. Às vezes, após muitas operações, a coluna cromatográfica é lavada com 90-100% de solvente B (o solvente mais forte no sistema de fase reversa de dois solventes) por 20 volumes para eliminar contaminantes. Por exemplo, solventes não aquosos como metanol, acetonitrila e tetra-hidrofurano podem ser usados para os lipídios residuais na coluna. 
De um modo geral, todos os métodos de limpeza têm formas semelhantes. Os solventes usados aumentam com a força do solvente. Muitas vezes, o último solvente é muito hidrofóbico (como acetato de etila ou mesmo hidrocarboneto) e pode ser usado para dissolver substâncias não polares, como lipídios e óleos. Devemos garantir que cada solvente em uma série de solventes possa ser misturado com o próximo solvente. Ao final do processo de limpeza, é necessário retornar ao sistema solvente original com o auxílio de um solvente miscível de média intensidade. Por exemplo, o isopropanol é um solvente muito bom como etapa intermediária porque é miscível com n-hexano ou diclorometano e também com solventes da fase aquosa. No entanto, a viscosidade do isopropanol é muito alta e uma vazão baixa deve ser assegurada para evitar pressão excessiva da bomba. Ao lavar a coluna cromatográfica, o líquido de lavagem é conectado diretamente ao frasco de resíduos da extremidade de saída da coluna cromatográfica e não pode fluir através da célula de detecção para evitar a contaminação da célula de detecção. A coluna cromatográfica de fase reversa não usa solução tampão, use a seguinte série de solventes para regenerar: 100% metanol → 100% acetonitrila → 75% acetonitrila-25% isopropanol → 100% isopropanol → 100% cloreto de metileno → 100% n-hexano → 100% cloreto de metileno → 100% isopropanol → 100% acetonitrila. A coluna de cromatografia de fase reversa usa solução tampão, use a seguinte série de solventes para regenerar: água → acetonitrila → clorofórmio (ou isopropanol) → acetonitrila → água.
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